Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
А.Ю.ПОПОВА
8 октября 2025 г.
2.2. ГИГИЕНА ТРУДА
МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
МР 2.2.0393-25
I. Область применения
1.1. Настоящие методические рекомендации (далее - МР) описывают методические подходы к выполнению комплекса лабораторных методов диагностики профессиональных аллергических заболеваний, связанных с воздействием химических веществ в рамках проведения предварительных и периодических медицинских осмотров.
1.2. Настоящие МР предназначены для специалистов органов и организаций, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор), а также могут быть использованы специалистами медицинских организаций любой формы собственности, имеющих право на проведение предварительных и периодических медицинских осмотров <1>, центров профпатологии, имеющих право на проведение экспертизы связи заболевания с профессией и профессиональной пригодности <2>, а также научно-исследовательских и образовательных организаций, реализующих образовательные программы по подготовке и повышению квалификации врачей-специалистов гигиенического профиля.
--------------------------------
<1> Пункт 4 приказа Минздрава России
от 28.01.2021 N 29н "Об утверждении порядка проведения обязательных предварительных и периодических медицинских осмотров работников, предусмотренных частью четвертой статьи
213 Трудового кодекса Российской Федерации, перечня медицинских противопоказаний к осуществлению работ с вредными и (или) опасными производственными факторами, а также работам, при выполнении которых проводятся обязательные предварительные и периодические медицинские осмотры" (зарегистрирован Минюстом России 29.01.2021, регистрационный N 62277), с изменениями, внесенными приказами Минздрава России от 01.02.2022 N 44н (зарегистрирован Минюстом России 09.02.2022, регистрационный N 67206);
от 02.10.2024 N 509н (зарегистрирован Минюстом России 01.11.2024, регистрационный N 79994) (далее - приказ Минздрава России
от 28.01.2021 N 29н).
<2> Пункт 44 приказа Минздрава России
от 28.01.2021 N 29н.
II. Общие положения
2.1. Совершенствование лабораторных технологий диагностики различных болезней требует пересмотра методов аллергодиагностики. Внедрение автоматизированных высокопроизводительных систем, совершенствование методик выявления маркеров аллергических заболеваний, а также синтез новых химических веществ требуют кардинального пересмотра вопросов диагностики профессиональных аллергических заболеваний. Критериями выбора метода лабораторной диагностики является тип аллергической реакции, наличие тестов лабораторной диагностики для выявления причинно-значимого аллергена.
2.2. Лабораторные методы диагностики имеют ряд преимуществ перед методами in vivo, в связи с быстротой получения результата, безопасностью для пациента, отсутствием необходимости отмены лекарственного препарата, возможностью одновременного исследования наличия сенсибилизации к большому количеству аллергенов [1].
2.3. В настоящих МР представлена схема "Рекомендуемые этапы лабораторной диагностики профессиональных аллергических заболеваний" (см. приложение 2 к настоящим МР) и рекомендуемые этапы проведения лабораторных методов исследований пациентов с аллергическими заболеваниями, работающих в контакте с промышленными аллергенами, (см. приложение 3 к настоящим МР), в зависимости от наличия или отсутствия противопоказаний к обследованию in vivo.
2.4. Схемы "Рекомендуемые этапы диагностики аллергических болезней органов дыхания, ассоциированных с профессией" (см. приложение 1 к настоящим МР), "Рекомендуемые этапы диагностического поиска при диагностике профессиональных аллергических заболеваний" (см. приложение 3 к настоящим МР) рекомендуется применять при диагностике респираторных заболеваний аллергической этиологии. При диагностике других аллергических заболеваний, обследование рекомендуется проводить по той же схеме, исключая спирометрию и провокационные назальные, ингаляционные тесты.
2.5. Диагностика профессионального аллергического заболевания начинается с выявления состояния, патогномоничного профессиональному, наличия контакта с аллергеном на рабочем месте в санитарно-гигиенической характеристике условий труда. Профпатолог, проводящий экспертизу определяет план обследования в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями <3>, а также приказами Минздрава России <4>.
--------------------------------
<3> СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации
от 28.01.2021 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный N 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации
от 11.02.2022 N 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный N 67587);
от 25.05.2022 N 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный N 68934);
от 25.06.2025 N 12 (зарегистрировано Минюстом России 25.07.2025, регистрационный N 83058); СП 2.1.3678-20 "Санитарно-эпидемиологические требования к эксплуатации помещений, зданий, сооружений, оборудования и транспорта, а также условиям деятельности хозяйствующих субъектов, осуществляющих продажу товаров, выполнение работ или оказание услуг", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации
от 24.12.2020 N 44 (зарегистрировано Минюстом России 30.12.2020, регистрационный N 61953), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 14.04.2022 N 12 (зарегистрировано Минюстом России 15.04.2022, регистрационный N 68213); от 20.03.2024 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 12.07.2024, регистрационный N 78805).
<4> Приказ Минздрава России
от 18.05.2021 N 464н "Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований" (зарегистрирован Минюстом России 01.06.2021, регистрационный N 63737), с изменениями, внесенными приказом Минздрава России
от 23.11.2021 N 1088н (зарегистрирован Минюстом России 30.11.2021, регистрационный N 66103); приказ Минздравсоцразвития России
от 23.07.2010 N 541н "Об утверждении единого квалификационного справочника должностей руководителей, специалистов и служащих, раздел "Квалификационные характеристики должностей работников в сфере здравоохранения" (зарегистрирован Минюстом России 25.08.2010, регистрационный N 18247), с изменениями, внесенными приказом Минтруда России
от 09.04.2018 N 214н (зарегистрировано Минюстом России 19.06.2018, регистрационный N 51386) (далее - приказ Минздравсоцразвития России
от 23.07.2010 N 541н).
2.6 Выбор метода.
2.7. Выбор чувствительного метода (приложение 4 к настоящим МР).
2.7.1. Диагностика профессиональных аллергических болезней анафилактического типа иммуноглобулин E (далее - IgE) зависимые: заболевания верхних дыхательных путей, связанные с воздействием химических веществ, обладающих аллергенным действием (аллергический ринит, аллергический синусит, аллергический фарингит, аллергический ларингит, отек Квинке), профессиональная бронхиальная астма аллергическая, анафилактический шок проводится с использованием серологических методов исследования (определение специфических IgE): твердофазный неконкурентный непрямой иммуноферментный анализ (далее - ИФА) (например, Allergy Explorer, далее - Alex <5>); иммуноблоттинг (например, PROTIA Allergy-Q <6>); иммунофлюоресценция на твердой фазе (например, англ. Immuno Solid-phase Allergy Chip, далее - ImmunoCAP <7>); иммунохроматографический анализ (далее - ИХА).
--------------------------------
<5> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.
<6> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.
<7> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.
2.7.2. Диагностика профессиональных аллергических болезней цитотоксического, иммунокомплексного типов и гиперчувствительности замедленного типа, заболевания, связанные с воздействием химических веществ, обладающих аллергенным действием - аллергический контактный дерматит, экзема, аллергическая крапивница, гиперчувствительный пневмонит (экзогенный аллергический альвеолит), лекарственная аллергия, анафилактический шок, проводится с определением специфических иммуноглобулинов G (далее - IgG) методами: ИФА, иммуноблоттинг (например, технология ProtiaAllergy-Q <8>), метод иммунофлюоресценции (например, технология ImmunoCAP <9>), твердофазный ИФА (например, технология Alex <10>) и ИХА.
--------------------------------
<8> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.
<9> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.
<10> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.
2.7.3. Диагностика не IgE-опосредованных анафилактоидных тяжелых системных реакций проводится с использованием методов: тест активации базофилов (англ. Basophil Activation Test, далее - BAT) технология АлкорБио <11>, тест трансформации лимфоцитов.
--------------------------------
<11> Примечание: допускается использовать тест-системы с аналогичными или лучшими характеристиками.
2.7.4. Определение мутаций HLA-B*57:01, HLA-B*15:02, HLA-*31:01, HLA-B*58:01 (человеческие лейкоцитарные антигены (далее - АГ), или система тканевой совместимости человека (далее - HLA) не является методом выявления сенсибилизации, но в отсутствии других лабораторных тестов, также может стать доказательством лекарственной сенсибилизации.
2.8. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала <12>.
--------------------------------
<12> Приказ Минтруда России N 988н, Минздрава России N 1420н от 31.12.2020 "Об утверждении перечня вредных и (или) опасных производственных факторов и работ, при выполнении которых проводятся обязательные предварительные медицинские осмотры при поступлении на работу и периодические медицинские осмотры" (зарегистрирован Минюстом России 29.01.2021, регистрационный N 62278).
2.8.1. Забор крови проводится в утренние часы, натощак в одноразовую вакуумную пробирку:
- для проведения ИФА и ИХА с активатором свертывания (диоксид кремния, лимонная кислота, натрия цитрат, декстроза либо разделительный гель);
- для BAT с противосвертывающим агентом крови (гепарин);
- для теста трансформации лимфоцитов с противосвертывающим агентом крови (литий-гепарин).
2.8.2. Транспортировка пробирок с пробами производится в вертикальном положении для минимизации риска вытекания, а также для того, чтобы в контейнерах успели сформироваться сгустки и во избежание излишнего перемешивания крови в контейнерах (что может привести к гемолизу проб). Во время транспортировки проб в лабораторию необходимо отслеживать соблюдение температурного режима (плюс 2 - 8 °C), оптимального для проведения исследования.
Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении.
2.8.3. Пробоподготовка для проведения исследования и хранение биологического материала.
2.8.3.1. ИФА и ИХА.
Для отделения сыворотки используется центрифуга (10 минут при 3000 об/мин или 20 минут при 1500 об/мин). Пробы всегда хранят в закрытых пробирках для сохранения целостности проб. Разделительные элементы (гель) повышают стабильность пробы и сроки хранения. Следует избегать встряхивания пробирок с пробами, что увеличивает риск гемолиза. Образцы сыворотки крови не должны содержать видимых глазу включений. Образцы (аликвотированная сыворотка крови) необходимо хранить в закрытых пробирках, предотвращающих микробную контаминацию при температуре плюс 2 - 8 °C не более 5 суток.
Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении, протоколе исследования.
Допустима однократная заморозка пробирок с аликвотами сыворотки крови при температуре ниже минус 20 °C в течение 5 месяцев. Размораживание замороженных образцов сыворотки крови должно проводиться при температуре плюс 18 - 25 °C не менее 30 минут.
2.8.3.2. Тест BAT.
Пробы всегда хранят в закрытых пробирках для сохранения целостности проб. Следует избегать встряхивания пробирок с пробами, что увеличивает риск гемолиза. Образцы цельной крови не должны содержать видимых глазу включений. Образцы цельной крови в закрытых пробирках могут храниться при температуре плюс 3 - 8 °C в течение 4 часов.
Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении, протоколе исследования.
Допустима однократная заморозка пробирок с аликвотами цельной крови при температуре ниже минус 20 °C не более 2 месяцев. Размораживание замороженных проб должно проводиться при температуре плюс 18 - 25 °C не менее 30 минут.
2.8.3.3. Тест бласттрансформации лимфоцитов.
Образцы цельной крови в закрытых пробирках могут храниться при температуре плюс 2 - 8 °C в течение 1 - 2 суток. Заморозка образцов не допускается.
Все случаи нарушения условий транспортирования или сроков доставки должны быть зарегистрированы в направлении, протоколе исследования.
2.9. Требования к оснащению лаборатории и квалификации персонала <13>.
--------------------------------
<13> Приказ Минздравсоцразвития России
от 23.07.2010 N 541н; приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н "Об утверждении перечня профессиональных заболеваний" (зарегистрирован Минюстом России 18.04.2025, регистрационный N 81893) (далее - приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н); приказ Минздрава России
от 29.04.2025 N 258н "Об утверждении порядка проведения экспертизы связи заболевания с профессией, учетной формы извещения об установлении диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, уточнении или отмене диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, учетной формы медицинского заключения о наличии или об отсутствии профессионального заболевания, порядка учета профессионального заболевания органом государственного санитарно-эпидемиологического контроля (надзора), проводившим расследование обстоятельств и причин возникновения у работника профессионального заболевания, формы протокола заседания комиссии по расследованию случая профессионального заболевания" (зарегистрировано Минюстом России 02.06.2025, регистрационный N 82491) (далее - приказ Минздрава России
от 29.04.2025 N 258н).
2.9.1. Клинические лабораторные исследования проводятся в медицинских организациях или иных организациях, осуществляющих медицинскую деятельность на основании лицензии, предусматривающей выполнение работ (услуг) по клинической лабораторной диагностике, согласно стандарту оснащения клинико-диагностической лаборатории.
2.9.2. Клинические лабораторные исследования проводятся медицинскими работниками при наличии высшего и среднего профессионального образования, предусмотренного квалификационными требованиями к медицинским работникам, прошедшими аккредитацию или имеющими сертификат специалиста и (или) документ о дополнительном профессиональном образовании (повышение квалификации) по заявленной деятельности в сфере выполнения клинических лабораторных исследований <14>.
--------------------------------
<14> Приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н.
2.9.2.1. Преаналитический лабораторный этап проводится медицинскими работниками со средним медицинским образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, лаборант) с образованием по специальности "Лабораторная диагностика", "Лабораторное дело", "Бактериология".
Аналитический этап включает проведение клинических лабораторных исследований с использованием аналитических методик, реагентов и оборудования, и проводится медицинскими работниками со средним (см. выше) и высшим медицинским образованием по специальности "Клиническая лабораторная диагностика" (врач клинической лабораторной диагностики), а также высшим немедицинским образованием (биологи).
Постаналитический этап включает валидацию, интерпретацию результатов с оформлением лабораторного заключения (при необходимости), передачу результатов лечащему врачу или пациенту, и проводится медицинскими работниками с высшим медицинским образованием по специальности "Клиническая лабораторная диагностика" (врач клинической лабораторной диагностики), а также высшим немедицинским образованием (биологи) <15>.
--------------------------------
<15> Приказ Минздрава России от 21.03.2025 N 141н; приказ Минздравмедпрома России от 16.08.1994 N 170 "О мерах по совершенствованию профилактики и лечения ВИЧ-инфекции в Российской Федерации", с изменениями, внесенными приказом Минздравмедпрома России от 18.04.1995 N 100; приказ Минздрава СССР от 12.07.1989 N 408 "О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране".
2.9.3. Требования к безопасности.
Для обеспечения безопасного труда сотрудникам иммунологических лабораторий следует руководствоваться международными стандартами надлежащей лабораторной практики (англ. Good Laboratory Practice, GLP) <16>, а также общегосударственными законами и ведомственными документами по технике безопасности при проведении работ в лаборатории <17>.
--------------------------------
<16> ГОСТ 33044-2014 "Принципы надлежащей лабораторной практики", введенный приказом Росстандарта
от 20.11.2014 N 1700-ст.
<17> Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда", утвержденное руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005 (далее - Р 2.2.2006-05).
Во время работы в лаборатории следует соблюдать правила техники безопасности. Каждый работающий должен быть информирован о требованиях техники безопасности, принятых в лаборатории, и о местонахождении средств противопожарной безопасности, аптечки для оказания работникам первой помощи. Для ознакомления с правилами безопасного проведения работ организуется регулярный инструктаж сотрудников. Результаты инструктажа заносятся в специальный журнал.
2.9.4. Условия выполнения измерений:
- технически исправное оборудование, включенное в Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений <18>;
--------------------------------
<18> Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений (утвержденные типы средств измерений) - fgis.gost.ru/fundmetrology/registry/4 (в свободном доступе).
- достаточная квалификация персонала (см. п. 2.8.2);
- соблюдение правил при подготовке исследуемых образцов;
- правильный выбор наборов реагентов/тест-систем, соблюдение условий их доставки и хранения;
- соблюдение правил при подготовке и постановке ИФА и ИХА;
- правильный учет и интерпретация результатов;
- внешний и внутрилабораторный контроль качества;
- постановку иммуноферментного анализа следует проводить при температуре плюс 18 - 25 °C;
- не использовать компоненты с истекшим сроком годности;
- при работе нельзя использовать компоненты из разных наборов реагентов/тест-систем и разных серий;
- перед использованием выдержать все компоненты набора при температуре плюс 18 - 25 °C не менее 30 минут;
- нельзя проводить анализ в присутствии реактивных паров (кислот, щелочей, альдегидов) или пыли, которые могут повлиять на ферментативную активность конъюгата;
- не использовать для дезинфекции исследуемых материалов и посуды средства, содержащие активный кислород и хлор, т.к. это приводит к искажению результатов;
- не допускается загрязнения компонентов набора, необходимо использовать чистую посуду, чистые одноразовые наконечники для каждого компонента и исследуемого образца, предпочтительно применение материалов одноразового использования;
- ферментативная реакция чувствительна к присутствию ионов металлов, не допускать контакта металлических предметов с конъюгатом и раствором тетраметилбензидина (далее - ТМБ);
- не использовать одну и ту же емкость для разных растворов;
- необходимо использовать воду дистиллированную по ГОСТ Р 58144-2018;
- не подвергать реагенты воздействию высокой температуры и прямых солнечных лучей;
- если при внесении образца допущена ошибка, повторное внесение образца после аспирации недопустимо;
- при промывке посуды необходимо соблюдать рекомендованное количество циклов промывки, неправильно проведенный этап промывки может привести к неточным результатам.
III. Определение специфических IgE и IgG
Определение специфических IgE
3.1. Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА.
3.1.1. Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА основан на применении антител (далее - АТ) и АГ фиксированных на нерастворимых носителях.
3.1.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).
3.1.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.
3.1.4. Оборудование, расходные материалы и реактивы, необходимые при работе.
3.1.4.1. Для ручной постановки:
1) оборудование <19>:
--------------------------------
<19> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);
- пипетки полуавтоматические одноканальные и многоканальные варьирующие со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 10 - 1000 мкл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (ошибка +/- 3%);
- цилиндр мерный вместимостью 500 мл, исполнения 2, 1 класса точности, ГОСТ 1770-74;
- стакан мерный вместимостью 25 мл, исполнения 2, 1 или 2 класса точности, ГОСТ 1770-74;
- прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер);
- термостат, поддерживающий температуру (37 +/- 1) °C;
- холодильник бытовой.
2) расходные материалы <20>:
--------------------------------
<20> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- дезинфицирующие средства;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива отработанных жидкостей;
- перчатки резиновые.
3) Набор реагентов, совместимых с методикой <21>:
--------------------------------
<21> Примечание: допускается использование реагентов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- полистироловый 96-луночный наборный планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgE-AT (референс-стрип); стрипы, покрытые аллергенами;
- калибровочные пробы для определения IgE: калибровочная проба 0, содержащая 0 мкг/мл; калибровочная проба D, содержащая 0,5 мкг/мл; калибровочная проба C, содержащая 1 мкг/мл; калибровочная проба B, содержащая 2 мкг/мл; калибровочная проба A, содержащая 5 мкг/мл;
- коньюгат моноклональных антител (далее - МКАТ) анти-IgE, 100-кратный концентрат;
- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;
- ТМБ;
- стоп-реагент;
- трафарет для анализа;
- инструкция по применению;
- паспорт.
3.1.4.2. Для автоматической постановки:
1) Оборудование <22>:
--------------------------------
<22> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- автоматический ИФА-анализатор открытого типа, с возможностью регистрации оптической плотности при длине волны 450 нм (основной) и 620 нм (референсной);
- холодильник бытовой;
- дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл;
- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл, ГОСТ 1770-74.
2) расходные материалы <23>:
--------------------------------
<23> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- перчатки резиновые;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива отработанных жидкостей;
- дезинфицирующие средства.
3) Набор реагентов, совместимых с методикой <24>:
--------------------------------
<24> Примечание: допускается использование реагентов с аналогичными или лучшими характеристиками.
Состав набора на примере набора реагентов от производителя ГК "АлкорБио" (состав набор может меняться в зависимости от производителя):
- полистироловый 96-луночный наборный пластиковый планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgE-AT (референс-стрип), стрипы, покрытые аллергенами;
- калибровочные пробы для определения IgE: калибровочная проба 0, содержащая 0 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 0,5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 1 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 25 МЕг/мл; калибровочная проба, содержащая 100 МЕг/мл;
- контрольная сыворотка с известным содержанием IgE;
- коньюгат МКАТ анти-IgE, 100-кратный концентрат;
- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;
- ТМБ;
- стоп-реагент;
- трафарет для анализа;
- инструкция по применению;
- паспорт.
3.1.5. Проведение методики:
3.1.5.1. Сорбция АГ. В каждую лунку 96-луночного планшета внести 0,1 - 0,5 мкг АГ и 100 мкл 0,05 М карбонат-бикарбонатного буферного раствора (pH 9,6), произвести сорбцию при температуре плюс 4 °C в течение 16 часов. Произвести инкубацию при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмыть (двукратно) не связавшиеся молекулы АГ фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0), содержащим 0,1% твин-20 (по 300 мкл на лунку).
3.1.5.2. Блокировка. Лунки планшета заполнить фосфатно-солевым буферным раствором (pH 9,0), содержащим 1% раствор бычьего сывороточного альбумина или других белков (например, казеина, желатина, сухого молока), и инкубировать 10 - 15 минут при температуре плюс 18 - 25 °C.
3.1.5.3. Титрование специфических АТ. АТ титруют в серийных разведениях параллельно со стандартным образцом (СО). В первую лунку ряда внести готовое разведение АТ - в среднем 1 - 10 мкг на лунку, произвести последовательное разведение АТ в лунках. Инкубировать со специфическими АТ, конъюгированные с ферментной меткой, 30 минут при комнатной температуре при встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмыть 3 - 4 раза с помощью фосфатно-солевого буферного раствора pH 9,0, содержащего 0,1% твин-20.
3.1.5.4. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся появлением окрашенного продукта. В лунки внести по 100 мкл раствора субстрата и инкубировать 10 минут при комнатной температуре и постоянном перемешивании. Для остановки ферментативной реакции применять "стоп реагент", добавлять во все исследуемые и контрольные пробы в равных количествах. Методом колориметрии определить концентрацию окрашенного продукта, используя инструкцию от производителя набора реагентов/тест-систем произвести интерпретацию полученных результатов.
3.1.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.1) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).
Таблица 3.1
Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови
Результат, кЕ/л | Класс | Интерпретация |
< 50 | 0 | Отрицательный |
50 - 100 | 1 | Легкая аллергическая реакция |
100 - 200 | 2 | Умеренная аллергическая реакция |
200 - 400 | 3 | Высокая аллергическая реакция |
> 400 | 4 | Очень высокая аллергическая реакция |
3.2. Иммунохроматографический метод.
3.2.1. Качественное экспресс определение методом ИХА.
3.2.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови.
3.2.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.
3.2.4. Оборудование и материалы <25>:
--------------------------------
<25> Примечание: допускается использование оборудования и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- центрифуга 1500 об/мин;
- набор тест-систем, совместимых с методикой.
3.2.5. Методика (см. прилагаемую инструкцию к набору теста):
- смешение исследуемой сыворотки венозной крови с буфером;
- добавление пробы на зону для образца;
- ожидание в течение 5 - 15 минут, пока фронт жидкости пройдет по мембране и появятся цветные тестовая и контрольная линии;
- визуальная оценка результата с использованием инструкции от производителя набора тест-систем.
3.2.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 3, 4 к настоящим МР):
1 - тестовая линия (T) и контрольная линия (C) окрашены - результат теста положительный;
2 - тестовая линия (T) не окрашена, но контрольная линия (C) окрашена - результат теста отрицательный;
3 - тестовая линия (T) и контрольная линия (C) не окрашены - результат теста недействительный;
4 - тестовая линия (T) окрашена, но контрольная линия (C) не окрашена - результат теста недействительный.
3.3. Метод иммуноблоттинга.
3.3.1. Иммуноблоттинг (иммуноблот) - метод выявления антител к отдельным антигенам, основанный на постановке иммуноферментного анализа на нитроцеллюлозных мембранах.
3.3.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови.
3.3.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 3 к настоящим МР.
3.3.4. оборудование и материалы, необходимые при работе.
3.3.4.1. Для ручной постановки:
1) Оборудование <26>:
--------------------------------
<26> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- орбитальное качающее устройство или качающее устройство (например, КУ-400);
- аспиратор вакуумный;
- пинцет пластмассовый;
- пипетки автоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3%);
2) расходные материалы <27>:
--------------------------------
<27> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- цилиндры мерные вместимостью 10 мл и 200 мл, ГОСТ 1770-74;
- стаканы мерные вместимостью 10 мл и 200 мл, ГОСТ 1770-74;
- перчатки резиновые;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива отработанных жидкостей;
- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;
- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;
- одноразовая посуда для приготовления рабочих растворов конъюгата и хромогена;
3) Набор реагентов, совместимых с методикой <28>:
--------------------------------
<28> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками. Состав набора может меняться в зависимости от производителя.
Состав набора на примере набора реагентов от производителя:
- тестовые стрипы, покрытые антигенами IgE;
- контрольная сыворотка с известным содержанием IgE;
- ферментный конъюгат;
- универсальный буфер;
- раствор субстрата: нитросиний тетразолий хлорид/5-бром-4-хлор-3-индолил-фосфат (NBT/BCIP), готов к использованию;
- лоток для инкубации;
- инструкция по применению набора;
- паспорт набора.
3.3.4.2. Для автоматической постановки:
1) оборудование <29>:
--------------------------------
<29> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- прибор для автоматизации иммуноблота;
- холодильник бытовой;
- дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл;
2) расходные материалы <30>:
--------------------------------
<30> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- перчатки резиновые;
- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл, ГОСТ 1770-74;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- дезинфицирующие средства.
3) Набор реагентов, совместимых с методикой <31>:
--------------------------------
<31> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными или лучшими характеристиками.
Состав набора (см. п. 3.3.4.1).
3.3.5. Методика:
- подготовка нитроцеллюлозной мембраны с аллергенами;
- внесение сыворотки больного (специфические АТ связываются с соответствующими АГ);
- добавление АТ против иммуноглобулинов человека, меченных ферментом;
- добавление субстрата и учет реакции.
3.3.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.2) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).
Таблица 3.2
Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови
Результат, kU/L | Класс | Интерпретация |
< 0,35 | 0 | Не поддается обнаружению |
0,35 - 0,7 | 1 | Низкий уровень |
0,7 - 3,5 | 2 | Средний уровень |
3,5 - 17,5 | 3 | Высокий уровень |
17,5 - 50 | 4 | Очень высокий уровень |
50 - 100 | 5 | Очень сильно высокий уровень |
> 100 | 6 | Чрезвычайно высокий уровень |
3.4. Иммунофлюоресцентный анализ (технология ImmunoCAP).
3.4.1. Иммунофлюоресцентный анализ ImmunoCAP - метод выявления специфических АГ к широкому спектру аллергокомпонентов (112 единиц) из 51-го источника аллергенов с помощью IgE конъюгированных с флюорохромом.
3.4.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).
3.4.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.
3.4.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.
1) оборудование <32>:
--------------------------------
<32> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- автоматизированный проточный цитометр со стандартными источниками синего (488 нм) и красного (638 нм) лазера;
2) расходные материалы <33>:
--------------------------------
<33> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- перчатки резиновые;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- дезинфицирующие средства;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива отработанных жидкостей;
3) Набор реагентов <34>.
--------------------------------
<34> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.
Состав набора in vitro:
- ImmunoCAP ISAC 112i Chip, чип;
- ImmunoCAP ISAC E Detection Antibody, конъюгат;
- ImmunoCAP ISAC E Control, калибратор;
- инструкция по применению.
3.4.5. Методика:
- сбалансированная смесь специфических ингаляционных аллергенов (Phadiatop), либо индивидуальный специфический аллерген (в зависимости от выбранной методики), ковалентно связанные с ImmunoCAP, реагируют со специфическими IgE в образце сыворотки пациента. Комплекс "АГ-АТ" связываются меченные ферментом АТ против IgE;
- инкубация с проявляющим реагентом и измерение уровня флюоресценции элюата по калибровочной кривой.
3.4.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.3) оценивается с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).
Таблица 3.3
Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови
Результат, МЕ/мл | Интерпретация |
< 0,3 | Отрицательно |
0,3 - 0,9 | Низкий уровень |
1 - 14,9 | Высокий уровень |
> 215 | Очень высокий уровень |
3.5. Твердофазный ИФА (технология Alex).
3.5.1. Технология Alex - метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА, количественное определение соединений комплекса "антиген-антитело".
3.5.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).
3.5.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.
3.5.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.
3.5.4.1. Для ручной постановки см. п. 3.1.4.1 и набор реагентов Allergy Explorer2/50.
Состав набора Allergy Explorer2/50:
- аллергочип Alex2 (англ. Alex2 Cartridge);
- промывающий раствор Alex2 (англ. Alex2 Washing Solution);
- разбавитель образца Alex2 (англ. Alex2 Sample Diluent);
- детектирующие антитела Alex2 (англ. Alex2 Detection Antibody);
- субстратный раствор Alex2 (англ. Alex2 Substrate Solution);
- стоп-реагент Alex2 (англ. Alex2 Stop Solution);
- инструкция по эксплуатации в комплекте поставки.
3.5.4.2. Для автоматической постановки см. 3.1.4.2 и набор реагентов Allergy Explorer2/50.
3.5.5. Методика:
- сбалансированная смесь специфических ингаляционных аллергенов (Phadiatop), либо индивидуальный специфический аллерген (в зависимости от выбранной методики), ковалентно связанные с ImmunoCAP, реагируют со специфическими IgE в образце сыворотки пациента;
- комплекс "АГ-АТ" связываются меченным ферментом АТ против IgE;
- инкубация с проявляющим реагентом и измерение уровня флюоресценции элюата по калибровочной кривой.
3.5.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.4) определяется с учетом методики в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).
Таблица 3.4
Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови
Результат, kUA/L | Интерпретация |
< 0,3 | Отрицательно |
0,3 - 0,99 | Низкий уровень |
1 - 4,99 | Умеренный уровень |
5 - 14,99 | Высокий уровень |
> 15 | Очень высокий уровень |
3.6. Метод иммуноблоттинга и ИФА (технология Protia Allergy-Q).
3.6.1. Технология Protia Allergy-Q сочетает в себе метод ИФА и иммуноблоттинг (иммуноблот) - выявления антител к отдельным антигенам, основанная на постановке ИФА на нитроцеллюлозных мембранах.
3.6.2. Биоматериал: сыворотка венозной крови.
3.6.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.
3.6.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.
3.6.4.1. Для ручной постановки:
1) оборудование <35>:
--------------------------------
<35> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- орбитальное качающее устройство или качающее устройство (например, КУ-400);
- анализатор иммунологический фотометрический "Q-SMART" для диагностики in vitro на панелях PROTIA Allergy-Q, позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);
- аспиратор вакуумный;
- пипетки автоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3%);
- цилиндры мерные вместимостью 10 мл и 200 мл, ГОСТ 1770-74;
- стаканы мерные вместимостью 10 мл и 200 мл.
2) расходные материалы <36>:
--------------------------------
<36> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- пинцет пластмассовый;
- перчатки резиновые;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива отработанных жидкостей;
- флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;
- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;
- одноразовая посуда для приготовления рабочих растворов конъюгата и хромогена.
3) Набор реагентов Protia Allergy-Q <37>.
--------------------------------
<37> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.
Состав набора Protia Allergy-Q:
- панель для аллергенов;
- разбавитель образца;
- раствор антител;
- ферментный раствор;
- раствор субстрата;
- моющий раствор;
- инструкция по применению.
3.6.4.2. Для автоматической постановки:
1) оборудование <38>:
--------------------------------
<38> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- прибор для автоматизации иммуноблота;
- анализатор автоматический иммунологический фотометрический "Q-Station Elite" для диагностики in vitro на панелях "Protia", позволяющий производить измерение оптической плотности в лунках планшета при длине волны 450 нм (основная) и 620 нм (референсная);
- аспиратор вакуумный;
- холодильник бытовой;
- дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл;
- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл, ГОСТ 1770-74.
2) расходные материалы <39>:
--------------------------------
<39> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- перчатки резиновые;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- дезинфицирующие средства.
3) Набор реагентов Protia Allergy-Q <40>.
--------------------------------
<40> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.
Состав набора Protia Allergy-Q см. в п. 3.6.4.1.
3.6.5. Методика:
- метод ИФА, включающий себя одну нитроцеллюлозную мембрану;
- подготовка нитроцеллюлозной мембраны с аллергенами;
- внесение сыворотки больного (специфические АТ связываются с соответствующими АГ);
- добавление АТ против иммуноглобулинов человека, меченных ферментом;
- добавление субстрата и учет реакции.
3.6.6. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgE (табл. 3.5) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).
Таблица 3.5
Интерпретация результатов содержания IgE в сыворотке крови
Концентрация специфического IgE, kU/L | Класс | Интерпретация результата |
< 0,35 | 0 | Отрицательный |
0,35 - 0,69 | I | Неоднозначный, часто без клинических проявлений |
0,70 - 3,49 | II | Слабо позитивный |
3,50 - 17,49 | III |
17,50 - 52,49 | IV | Позитивный, с выраженными клиническими проявлениями |
52,50 - 99,99 | V |
> 100 | VI |
Определение специфических IgG (IgG 1, 4)
3.7. Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА - метод, основанный на применении АГ и АТ, фиксированных на нерастворимых носителях.
3.7.1. Биоматериал: сыворотка венозной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).
3.7.2. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.
3.7.3. Оборудование и материалы, необходимые при работе.
3.7.3.1. Для ручной постановки (см. п. 3.1.4.1).
Состав набора реагентов <41>:
--------------------------------
<41> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.
- полистироловый 96-луночный наборный планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgG-AT (референс-стрип); стрипы с адсорбированными аллергенами;
- полистироловый 96-луночный наборный планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgG4-AT (референс-стрип); стрипы с адсорбированными аллергенами;
- калибровочные пробы для определения IgG: калибровочная проба 0, содержащая 0 мкг/мл; калибровочная проба D, содержащая 0,5 мкг/мл; калибровочная проба C, содержащая 1 мкг/мл; калибровочная проба B, содержащая 2 мкг/мл; калибровочная проба A, содержащая 5 мкг/мл;
- калибровочные пробы для определения IgG 1, 4: калибровочная проба 0, содержащая 0 нг/мл; калибровочная проба D, содержащая 15 нг/мл; калибровочная проба C, содержащая 50 нг/мл; калибровочная проба B содержащая 150 нг/мл; калибровочная проба A, содержащая 500 нг/мл;
- коньюгат МКАТ анти-IgG, 100-кратный концентрат;
- коньюгат МКАТ анти-IgG1, 100-кратный концентрат;
- коньюгат МКАТ анти-IgG4, 100-кратный концентрат;
- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;
- ТМБ;
- стоп-реагент;
- трафарет для анализа;
- инструкция по применению;
- паспорт.
3.7.3.2. Для автоматической постановки (см. п. 3.1.4.2).
Состав набора реагентов <42>:
--------------------------------
<42> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками.
- полистироловый 96-луночный пластиковый планшет в составе: 8-луночный стрип, покрытый анти-IgG-AT (референс-стрип); стрипы с адсорбированными аллергенами;
- калибровочные пробы для определения IgG1: калибровочная проба 0, содержащая 0 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 0,5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 1 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 25 МЕг/мл; калибровочная проба, содержащая 100 МЕг/мл;
- калибровочные пробы для определения IgG4: калибровочная проба 0, содержащая 0 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 0,5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 1 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 5 МЕ/мл; калибровочная проба, содержащая 25 МЕг/мл; калибровочная проба, содержащая 100 МЕг/мл;
- контрольная сыворотка с известным содержанием IgG 1, 4;
- коньюгат МКАТ анти-IgG 1, 4, 100-кратный концентрат;
- промывающий раствор, 10-кратный концентрат;
- ТМБ;
- стоп-реагент;
- трафарет для анализа;
- инструкция по применению;
- паспорт.
3.7.4. Методика.
Метод твердофазного неконкурентного непрямого ИФА (см. п. 3.1.5).
3.7.5. Интерпретация результатов определения уровня содержания специфических IgG (табл. 3.6) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5 к настоящим МР).
Таблица 3.6
Интерпретация результатов содержания IgG в сыворотке крови
Результат, МЕ/мл | Интерпретация |
< 50 | отрицательно |
50 - 100 | легкое нарушение толерантности |
100 - 200 | умеренное нарушение толерантности |
> 200 | выраженное нарушение толерантности |
3.8. BAT.
3.8.1. Принцип метода: BAT основан на экспрессии рецепторов к IgG на поверхности базофилов, что при взаимодействии IgG с аллергеном приводит к высвобождению вазоактивных медиаторов и появлению новых молекул.
3.8.2. Биоматериал: гепаринизированные образцы цельной крови. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).
3.8.3. Список исследуемых аллергенов представлен в приложении 4 к настоящим МР.
3.8.4. Оборудование и материалы, необходимые при работе.
3.8.4.1. Для автоматической постановки:
1) оборудование <43>:
--------------------------------
<43> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- автоматизированный проточный цитометр со стандартными источниками синего (488 нм) и красного (638 нм) лазера;
2) расходные материалы <44>:
--------------------------------
<44> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- перчатки резиновые;
- вода дистиллированная, ГОСТ 58144-2018;
- дезинфицирующие средства.
3) Набор реагентов, совместимых с методикой <45>.
--------------------------------
<45> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками. Состав набора может меняться в зависимости от производителя.
Состав набора реагентов:
- коктейль антител CRTH2-FITC/CD203c-PE/CD3-PC7;
- положительный контроль IgE-опосредованной активации базофилов;
- раствор для активации базофилов in vitro;
- раствор для остановки реакции активации;
- лизирующий раствор;
- фиксирующий раствор.
3.8.5. Методика:
- добавить 20 мкл PBS (фосфатно-солевой буфер) в пробирку "Neg" (отрицательный контроль); 20 мкл лизирующего раствора положительный контроль в пробирку "Pos" (положительный контроль); 20 мкл анализируемого аллергена в пробирку "Test" (различные разведения аллергена);
- добавить в каждую пробирку по 20 мкл реагента CRTH2-FITC/CD203c-PE/CD3-PC7;
- добавить в каждую пробирку по 100 мкл цельной крови;
- перемешать содержимое каждой пробирки на вортексе и инкубировать на водяной бане в течение 15 минут при температуре плюс 37 °C в защищенном от света месте;
- добавить в каждую пробирку по 100 мкл раствора для остановки реакции и перемешать на вортексе в течение 5 секунд;
- добавить в каждую пробирку по 2 мл раствора для лизирования с одновременной фиксацией и перемешать;
- инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре (плюс 18 - 25 °C) в защищенном от света месте.
- отцентрифугировать пробирки в течение 5 минут при 200 об/мин и удалить супернатант аспирацией;
- добавить в каждую пробирку по 3 мл PBS;
- отцентрифугировать пробирки в течение 5 минут при 200 об/мин и удалить супернатант аспирацией;
- ресуспендировать осадок клеток в 0,5 мл 0,1% раствора формальдегида в PBS;
- проанализировать пробы на проточном цитофлуориметре.
3.8.6. Интерпретация результатов оценки уровня содержания специфических IgG (табл. 3.7) проводится с учетом методики, в соответствии с инструкциями производителей наборов реагентов/тест-систем и оборудования (список исследуемых аллергенов представлен в приложениях 4, 5).
Таблица 3.7
Интерпретация результатов содержания специфических IgG
Результат теста | Интерпретация данных |
Индекс активации базофилов на исследуемый аллерген превышает пороговое значение <*> | Подтверждает наличие сенсибилизации к данному аллергену |
Высокая спонтанная активация базофилов <*> | Свидетельствует о выраженности аллергического воспаления |
Низкая активация на анти-IgG АТ (позитивный контроль) | Может наблюдаться при: - приеме системных или местных глюкокортико-стероидных препаратов; - выраженном аллергическом или инфекционном воспалении у пациентов с отягощенным аллергоанамнезом; - генетических особенностях проведения сигнала с участием тирозинкиназы Syk |
Высокое относительное количество Т-клеток 2-го типа | Подтверждает доминирующий 2-ой тип иммунного ответа. Характеризует интенсивность немедленных и замедленных реакций гиперчувствительности. Часто наблюдается при ангиоотеках и выраженных кожных проявлениях гиперчувствительности |
Примечание: <*> - тест с аллергеном рассматривается в качестве позитивного при различных индексах стимуляции, например, более 2, более 1,73, более 1,1 и 1,05, более 1,06. Во многих работах cut-off для разных аллергенов выбирается на основании проведения ROC-анализа. |
3.9. Тест трансформации лимфоцитов.
3.9.1. Принцип метода: выявление аллергической клеточно-опосредованной сенсибилизации (аллергия IV типа) на определенный компонент.
3.9.2. Биоматериал: цельная кровь с литий-гепарином. Отбор, транспортировка и хранение биологического материала (см. п. 2.8).
3.9.3. Оборудование, материалы и реагенты, необходимые при работе.
1) оборудование <46>:
--------------------------------
<46> Примечание: допускается использование оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
- бинокулярный световой микроскоп с увеличением 40x/0,65; 100x/1 (например, Микмед-5);
- термостат, поддерживающий температуру (37 +/- 1) °C;
- холодильник бытовой;
- стакан мерный вместимостью 25 мл, исполнения 2, 1 или 2 класса точности, ГОСТ 1770-74;
- пробирки стерильные вместимостью 5 мл, исполнения 2, 1 или 2 класса точности, ГОСТ 1770-74.
2) расходные материалы <47>:
--------------------------------
<47> Примечание: допускается использование расходных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.
- предметные и покровные стекла;
- бумага фильтровальная, ГОСТ 12026-76;
- дезинфицирующие средства;
- контейнер для сбора твердых отходов;
- контейнер для слива отработанных жидкостей.
3) Реагенты <48>:
--------------------------------
<48> Примечание: допускается использование других реагентов с аналогичными характеристиками. Состав набора может меняться в зависимости от производителя.
- набор красок для окрашивания по Романовскому-Гимзе <49>;
--------------------------------
<49> Приказ Минздрава России
от 29.04.2025 N 258н.
- масло иммерсионное;
3.9.4. Методика:
- отстоять кровь до получения четкого разделения эритроцитов и плазмы;
- полученную плазму поместить в стерильные флаконы со средой 199 и антибиотиками;
- в контрольные образцы добавить изотонический раствор, а в опытные - исследуемый антиген или митоген;
- инкубировать при температуре плюс 37 °C в течение 24 - 72 часов (для митогенов);
- для оценки пролиферации клеток в ответ на антиген время культивирования может быть увеличено до 6 - 7 суток;
- надосадочную жидкость ресуспендировать в среде 199, центрифугировать 15 - 20 минут 1500 об/мин, удалить надосадочную жидкость, добавить уксусную кислоту, повторно центрифугировать;
- осадок перенести на предметное стекло и окрасить по Романовскому-Гимзе;
- микроскопировать в иммерсионной системе, провести учет результатов.
Примечание: подсчитывают число малых лимфоцитов (диаметр клеток 7 - 7,5 мкм), бластоподобных переходных форм (8 - 14 мкм) и бластов (более 14 мкм); для корректной оценки процента бластной трансформации необходим подсчет 200 - 300 клеток. Провести учет спонтанной и стимулированной бластной трансформации.
3.9.5. Интерпретация: показатели в пределах нормы - уровень спонтанной реакции бластной трансформации лимфоцитов до 10%, стимулированной митогеном - 40 - 70%.
3.10. Определение HLA не является в полной мере методом выявления сенсибилизации, но в отсутствии других лабораторных тестов, также может стать доказательством лекарственной сенсибилизации.
Приложение 1
к МР 2.2.0393-25
РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ЭТАПЫ ДИАГНОСТИКИ
АЛЛЕРГИЧЕСКИХ БОЛЕЗНЕЙ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ,
АССОЦИИРОВАННЫХ С ПРОФЕССИЕЙ
Приложение 2
к МР 2.2.0393-25
РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ЭТАПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Приложение 3
МР 2.2.0393-25
РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ЭТАПЫ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО ПОИСКА
ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Приложение 4
к МР 2.2.0393-25
ПЕРЕЧЕНЬ
АГ К ПРОМЫШЛЕННЫМ АЛЛЕРГЕНАМ,
ДОСТУПНЫХ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ
N | Наименование вещества | Мажорный АГ | Метод исследования |
1 | 2 | 3 | 4 |
Пыльца растений |
1 | Акрил | b1-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
2 | Хлопок обработанный | b2-G |
3 | Хлопок необработанный | b3-G |
4 | Пыль (пыльца) от молотьбы | b4-G |
5 | Льняное волокно (льноволокно) | b5-G |
6 | Сено (сенная пыль | b7-G |
7 | Хмель | b8-G, w22 | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG, Protia |
8 | Джутовое волокно | b13-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
9 | Капок (растительный пух) | b14-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
10 | Лен | b16-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
11 | Тимофеевка луговая | g6 | Иммуноблоттинг |
g8 | ImmunoCAP |
p1 | Alex Protia |
rPhl p 5 | BAT (АлкорБио) |
12 | Натуральный шелк | b22-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
13 | Соломенная пыль | b23-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
14 | Табачная пыль | b24-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
15 | Пыль от молотьбы пшеницы | b26-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
16 | Клен (опилки) | b31-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
17 | Бук (опилки) | b32-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
18 | Дуб (опилки) | b33-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
19 | Ясень (опилки) | b34-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
20 | Ель (опилки) | b35-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
21 | Сосна (опилки) | b36-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
22 | Грецкий орех (опилки) | b40-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
23 | Абачи и абаши (опилки) | b41-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
24 | Пихта белая (опилки) | b44-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
25 | Можжевельник и кедр (опилки) | b43-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
26 | Тополь (опилки) | b50-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
27 | Ольха (опилки) | b52-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG, |
q 1 | Alex |
t2 | ImmunoCAP |
28 | Вишня или черешня (опилки) | b53-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
29 | Лиственница (опилки) | b55-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
30 | Зеленые кофейные зерна | k70-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
31 | Семена клещевины; касторовое масло | k71-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
32 | Исфагула, шелуха исфагулы псиллиум | k72-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
33 | Шелк (Тутовый шелкопряд) | k74-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
34 | Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) | k80-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
35 | Фикус Бенджамина | k81-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
36 | Гуаровая мука камедь пищевая добавка E412 | k83-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
37 | Семена подсолнечника | k84-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
38 | Рожь посевная | g12 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Protia |
39 | Береза | t3 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Protia |
tx rBet v 1 | BAT (АлкорБио) |
40 | Полынь | w6 | Иммуноблотинг Protia |
w5 | ImmunoCAP Alex |
nArt v 1 | BAT (АлкорБио) |
41 | Ольха | t2 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP |
tx | Protia |
42 | Лещина | t4 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP |
43 | Дуб | t7 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Protia |
44 | Амброзия полынолистная | w1 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Protia |
45 | Подорожник | w9 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Alex |
11 | Protia |
46 | Одуванчик обыкновенный | w8 | ImmunoCAP Protia |
47 | Ромашка | w206 | ImmunoCAP |
48 | Ива белая | t12 | ImmunoCAP Protia |
49 | Ежа сборная | g3 | ImmunoCAP Protia |
50 | Овсянница луговая | g4 | ImmunoCAP Protia |
51 | Райграс пастбищный/Плевел | g5 | ImmunoCAP |
52 | Мятлик луговой | g8 | ImmunoCAP Protia |
53 | Марь белая | w10 | ImmunoCAP |
54 | Зольник/солянка | w11 | ImmunoCAP |
55 | Овсяница луговая | g4 | ImmunoCAP Protia |
56 | Cladosporium herbarum | m2 | Иммуноблоттинг |
57 | Alternaria alternata | m6 | Иммуноблоттинг |
|
II. Металлы и химические соединения |
58 | Никель | k40-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
59 | Хром | k41-G |
60 | Золото | k43-G |
61 | Медь | k44-G |
62 | Платина | k45-G |
63 | Кобальт | k46-G |
64 | Палладий | k48-G |
65 | Хлорид алюминия | k49-G |
66 | Молибден | k50-G |
67 | Амальгама (сплав металлов с ртуть) | k52-G |
68 | ХлораминТ натриевая соль | k85-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
69 | Тримеллитовый ангидрид | k86-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
70 | Фенилендиамин | k87-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
71 | Амилоглюкозидаза фермент | 88-G, | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
72 | Гемицеллюлаза фермент | k89-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
73 | Семена подсолнечника | k84-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
74 | Липоксигеназа фермент | k90-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
75 | Канифоль абиетиновая кислота; эфиры канифоли зарегистрированы в качестве пищевой добавки E915 | k92-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
76 | Аммония пероксидисульфат пищевая добавка E923 | k93-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
77 | Коллаген животный, растительный | k94-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
78 | Трагакант трагакантовая камедь пищевая добавка E413 | k95-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
79 | Хинолиновый желтый азокраситель желто-зеленого цветапищевая добавка E104 | 96-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
80 | Толуилендиизоцианат ТДИ ароматический диизоцианат | k75-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
81 | Метилен дифенил диизоцианат МДИ (дифенилметанди-изоцианат) | k76-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
82 | Гексаметилендиизоцианат ГДИ (ароматический диизоцианат) | k77-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
83 | Этиленоксид (окись этилена, оксиран) | k78-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
84 | Фталевый ангидрид (ангидрид о-фталевой кислоты) | k79-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
III. Лекарственные и профессиональные аллергены |
85 | Каучук | k82-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
86 | Пенициллин G | c1 | ImmunoCAP |
87 | Пенициллин V | c2 | ImmunoCAP |
88 | Хлоргексидин | c8 | ImmunoCAP |
89 | Латекс | k82 | ImmunoCAP Protia |
b1 | Alex |
90 | Формальдегид/формалин | k80 | ImmunoCAP |
91 | Пенициллин G | c1 | Dr. Fooke |
92 | Пенициллин V | c2 | Dr. Fooke |
93 | Ампициллин | c50 | Dr. Fooke |
94 | Цефалоспорин | c55 | Dr. Fooke |
95 | Амоксициллин | c56 | Dr. Fooke |
96 | Тетрациклин | c59 | Dr. Fooke |
97 | Ацетилсалициловая кислота | c51 | Dr. Fooke |
98 | Парацетамол | c85 | Dr. Fooke |
99 | Фенацетин | c111 | Dr. Fooke |
100 | Артикаин/Ультракаин | c68 | Dr. Fooke |
101 | Лидокаин/Асилокаин | c82 | Dr. Fooke |
IV. Эпителий животных и птиц |
102 | Овечья шерсть обработанная | b20-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
103 | Овечья шерсть необработанная | b21-G | Тест-система Specific, IgE ELISA IgG |
104 | Кошка | e1 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Protia |
e220 | Специфические IgG Alex |
105 | Собака | e2 | Иммуноблоттинг Специфические IgG |
e5 | ImmunoCAP Protia |
e308 | Alex |
106 | Лошадь | e3 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Alex Protia |
107 | Курица, перо | e85 | ImmunoCAP |
108 | Попугай | e89 | ImmunoCAP |
109 | Овца | e81 | ImmunoCAP Protia |
110 | Крупный рогатый скот | e100 | Alex |
111 | Коза E | e80 | Alex |
112 | Свинья | e83 | Alex |
113 | Tricophyton rubrum | m205 | Protia |
114 | Мышь | i3 | Protia |
115 | Крыса | e71/e73 | Protia |
116 | Кролик | e82 | Protia |
117 | Морская свинка | e6 | Protia |
118 | Хомяк | e8 | Protia |
V. Насекомые и их яды |
119 | Dermatophagoides pteronyssinus (клещ) | d1 | Иммуноблоттинг Protia ImmunoCAP Alex |
120 | Яд пчелы медоносной | i1 | ImmunoCAP Alex Protia |
121 | Яд осы пятнистой | i2 | ImmunoCAP |
122 | Яд осы обыкновенной | i3 | ImmunoCAP Alex Protia |
123 | Комар | i71 | ImmunoCAP |
124 | Таракан рыжий (прусак) | i6 | ImmunoCAP |
125 | Яд шершня | i75 | ImmunoCAP |
126 | Оса саксонская (Dolichovespula) | i25 | Alex |
127 | Огненные муравьи | i70 | Alex |
128 | Клеще домашний | d1 | Dr. Fooke |
VI. Плесневые грибы и микроорганизмы |
129 | Стафилококковый энтеротоксин A | m80 | ImmunoCAP |
130 | Стафилококковый энтеротоксин B | m81 | ImmunoCAP Protia |
131 | Стафилококковый энтеротоксин TSST | m226 | ImmunoCAP |
132 | Candida albicans | m5 | ImmunoCAP Protia |
133 | Malassezia spp. | m227 | ImmunoCAP |
134 | Penicillium notatum (плесневый гриб) | m1 | Иммуноблотинг ImmunoCAP Alex Protia Специфические IgG |
135 | Cladosporium herbarum (плесневый гриб) | m2 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Специфические IgG |
136 | Aspergillus fumigatus (плесневый гриб) | m3 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Специфические IgG Protia |
137 | Alternaria alternata (плесневый гриб) | m6 | Иммуноблоттинг ImmunoCAP Protia |
138 | Cladosporiumherbarum | m12 | Alex |
Приложение 5
к МР 2.2.0393-25
ПЕРЕЧЕНЬ АЛЛЕРГЕНОВ <50>
--------------------------------
<50> Приложение 5 Р 2.2.2006-05.
Таблица П5.1
Высокоопасные аллергены
N | Наименование вещества | N CAS | ПДК, мг/м3 <*> | Агрегатное состояние <*> | Класс опасности | Особенности действия <**> |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
1 | 2-Амино-2-дезокси-D-глюкозы гидрохлорид; Хитозамин; Глюкозамин гидрохлорид | 66-84-2 | 0,005 | а | 1 | - |
2 | Бациллихилин (по бацитрацину) | 140587-4 | 0,01 | а | 1 | - |
3 | Бензол-1,4-дикарбоновая кислота; Терефталевая кислота | 100-21-0 | 0,1 | п + а | 1 | - |
4 | Бериллий и его соединения (в пересчете на бериллий) | - | 0,003/0,001 | а | 1 | К |
5 | Гексаметилендиизоцианат+ | 822-06-0 | 0,05 | п | 1 | - |
6 | | 6108-10-7 | 0,05 | п + а | 1 | - |
7 | Гентамицин (смесь гентамицинсульфатов 1:2,5) - C1, (40%), C2 (20%), C1a (40%) | 1403-66-3 | 0,05 | а | 1 | - |
8 | Гептаникель гексасульфид | 12503-53-6 | 0,15/0,05 | а | 1 | К |
9 | Гигромицин Б+ | 31282-04-9 | 0,001 | а | 1 | - |
10 | Гризин | - | 0,002 | а | 1 | - |
11 | | 57-92-1 | 0,1 | а | 1 | - |
12 | | 32385-11-8 | 0,05 | а | 1 | - |
13 | 1,4-Диаминобензол; п-Фенилендиамин | 106-50-3 | 0,05 | п + а | 1 | - |
14 | 1,4-Диаминобензол дигидрохлорид 1,4-Фенилендиамин дигидрохлорид | 624-18-0 | 0,05 | п + а | 1 | - |
15 | 1,6-Диаминогексан; Гексаметилендиамин | 124-09-4 | 0,1 | п | 1 | - |
16 | Диаммоний гексахлорплатинат | | 0,005 | а | 1 | - |
17 | Диаминодихлорпалладий | 14323-43-4 | 0,005 | а | 1 | - |
18 | Диаммоний хром тетрасульфат-2,4-гидрат [по хрому (Cr+3)]; Хромаммиачные квасцы | - | 0,02 | а | 1 | - |
19 | N, N-Дибутил-4-(гексилокси) нафталин-1-карбоксимидамид+; Бунамидин гидрохлорид | 1055-55-6 | 0,01 | а | 1 | - |
20 | 1,3-Дигидро-1,3-диоксо-5-изобензо фуранкарбоновая кислота; Бензол-1,2,4-трикарбоновой кислоты 1,2-ангидрид; Тримеллитовой кислоты ангидрид | 552-30-7 | 0,05 | а | 1 | - |
21 | | 66-79-5 | 0,05 | а | 1 | - |
22 | 1,3-Ди(1-метилэтил) фенил-2-изоцианат+; 2,6-Диизопропилфенилизоцианат | 28178-42-9 | 0,1 | п | 1 | - |
23 | 1,3-Динитро-5-трифторметил-2-хлорбензол | 393-75-9 | 0,05 | п + а | 1 | - |
24 | 2,4-Динитро-1-хлорбензол | 97-00-7 | 0,2/0,05 | п + а | 1 | - |
25 | Дихромовая кислота, соли (в пересчете на Cr+6) | - | 0,01 | а | 1 | К |
26 | Кобальт гидридотетракарбонил | 16842-03-8 | 0,01 | п | 1 | О |
27 | Кобальт и его неорганические соединения+ | - | 0,05/0,01 | а | 1 | - |
28 | Меркаптоэтановая кислота+ | 68-11-1 | 0,1 | п + а | 1 | - |
29 | Метилдитиокарбамат натрия+ (по метилизоцианату); Карбатион; Метилдитиокарбаминовой кислоты натриевая соль | 137-42-8 | 0,1 | а | 1 | - |
30 | Метилизотиоцианат+ | 556-61-6 | 0,1 | п | 1 | - |
31 | Метилизоцианат+ | 624-83-9 | 0,05 | п | 1 | О |
32 | 3-[[(4-Метилпиперазин-1-ил) имино] метил] рифамицин+ | 13292-46-1 | 0,02 | а | 1 | - |
33 | 4-Метилфенилен-1,3-диизоцианат | 584-84-9 | 0,05 | п | 1 | О |
34 | 3-Метилфенилизоцианат | 621-29-4 | 0,1 | п | 1 | |
35 | Никель тетракарбонил | 13463-39-3 | 0,0005 | п | 1 | К |
36 | Никель хром гексагидрофосфат гидрат (по никелю); 1,7-Никель хром гекса (диводородфосфат) гидрат | - | 0,005 | п | 1 | К |
37 | Никель, никель оксиды, сульфиды и смеси соединений никеля (файнштейн, никелевый концентрат и агломерат, оборотная пыль очистных устройств) (по никелю) | - | 0,05 | а | 1 | К |
38 | Никеля соли в виде гидроаэрозоля (по никелю) | - | 0,005 | а | 1 | К |
39 | Самарий пентакобальтид+ (по кобальту); Кобальт-самариевая композиция магнитов | 12017-68-4 | 0,05 | а | 1 | - |
40 | 2-Фенил-4,6-дихлорпиридазин-3-(2H)-он | 2568-51-6 | 0,05 | а | 1 | - |
41 | Хром гидроксид сульфат (в пересчете на Cr+3); Хром серно-кислый основной | 12336-95-7 | 0,06/0,02 | а | 1 | - |
42 | Хром-2-6-дигидрофосфат (по хрому Cr+3); Хром фосфат однозамещенный | 27096-04-4 | 0,06/0,02 | а | 1 | - |
43 | Хром трихлорид гексагидрат (по хрому Cr+3) | 10060-12-5 | 0,03/0,01 | а | 1 | - |
44 | Хромовой кислоты соли (в пересчете на хром Cr+6) | - | 0,03/0,01 | а | 1 | К |
45 | Этиленимин+; Азиридин | 151-56-4 | 0,02 | п | 1 | О |
Примечание: + - требуется специальная защита кожи и глаз; <*> - преимущественное агрегатное состояние в воздухе в условиях производства: п - пары и (или) газы; а - аэрозоль. <**> - наряду с аллергическим эффектом представлены дополнительные особенности действия вещества: О - вещество с остронаправленным механизмом действия, К - канцероген, Ф - аэрозоль преимущественно фиброгенного действия. По степени доказанности опасности аллергена для человека и при испытании на животных аллергены разделяются на категории: - высокоопасный аллерген - имеются доказательства: респираторной гиперчувствительности человека к аллергену; сенсибилизации человека при контакте аллергена с кожными покровами; выраженного сенсибилизирующего действия при испытании на животных (сенсибилизированы все особи, Lim sens < Lim chr). Сенсибилизация является лимитирующим критерием гигиенического нормирования; - умеренно опасный аллерген - имеются доказательства: респираторной гиперчувствительности человека к аллергену; сенсибилизации человека при контакте аллергена с кожными покровами; умеренного сенсибилизирующего действия при испытании на животных (сенсибилизированы более 30 - 50% особей). Сенсибилизация не является лимитирующим критерием гигиенического нормирования: Lira sens равен или выше Lim chr |
Таблица П5.2
Умеренно опасные промышленные аллергены
N | Наименование вещества | N CAS | ПДК, мг/м3 <*> | Агрегатное состояние <*> | Класс опасности | Особенности действия <**> |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
1 | 2-(2-Алкил C10-13-2-имидазолин-1-ил) этанол | - | 0,1 | п + а | 2 | - |
2 | 2-Алкил C10-12-1 -полиэтиленполиамин- 2-имидазолин гидрохлорид+; Виказолина ВП хлоргидрат | - | 0,5 | а | 2 | - |
3 | Алюмоплатиновые катализаторы КР-101 и РБ-11 с содержанием платины до 0,6% | - | 1,5 | а | 3 | - |
4 | Амилаза | 9000-90-2 | 1 | а | 2 | - |
5 | 1-Аминоалкилимидазолины | | 0,5 | п + а | 2 | - |
6 | (2S,5R,6R)-6-[[(R)-Амино-(4-гидроксифенил)ацетил]амино]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-аза-бицикло[3,2,0]гептан-2-карбоновая кислота тригидрат (амоксициллин тригидрат) | - | 0,1 | а | 2 | - |
7 | | 37517-28-5 | 0,1 | а | 2 | - |
8 | | 8063-07-8 | 0,1 | а | 2 | - |
9 | | 37321-09-8 | 0,1 | а | 2 | - |
10 | | 1263-89-4 | 0,1 | а | 2 | - |
11 | | 32986-56-4 | 0,1 | а | 2 | - |
12 | | 551-16-6 | 0,4 | а | 2 | - |
13 | 3-[(4-Амино-2-метил-5-пиридинил) метил]-5-(2-гидроксиэтил)-4-метилазоний бромид; Тиаминбромид; Витамин B1 | 7019-71-8 | 0,1 | а | 2 | - |
14 | Аминопласты | - | -/6 | а | 4 | Ф |
15 | 1-Аминопропан-2-ол+ | 78-96-6 | 1 | п + а | 2 | - |
16 | N-(3-Аминопропил)-N-додецилпропан-1,3-диамин+ | 2372-82-9 | 1 | а | 2 | |
17 | | 69-53-4 | 0,1 | а | 2 | - |
18 | 2,2' [N-(2-Аминоэтил) имино] диэтанол, амиды C10-13 карбоновых кислот | - | 2 | п + а | 3 | - |
19 | N-(2-Аминоэтил)-1,2-этандиамин+; Диэтилентриамин | 111-40-0 | 0,3 | п + а | 2 | - |
20 | Антибиотики группы цефалоспоринов | - | 0,3 | а | 2 | - |
21 | Белково-витаминный концентрат (по белку) | - | 0,1 | а | 2 | - |
22 | Бензол-1,3-дикарбоновая кислота; 1,3-Бензолдикарбоновая кислота | 121-91-5 | 0,2 | а | 2 | - |
23 | Бензол-1,3-дикарбондихлорид+; Изофталоилдихлорид | 99-63-8 | 0,02 | п + а | 2 | - |
24 | Бензол-1,4-дикарбондихлорид+; Терефталоилдихлорид | 100-20-9 | 0,1 | п + а | 2 | - |
25 | Бензол-1,2,4-трикарбоновая кислота; 1,2,4-Трикарбоксибензол; Тримеллитовая кислота | 528-44-9 | 0,1 | а | 2 | - |
26 | [2] Бензопиранол[6,5,4-def]][2], бензопиран-1,3,6,8-тетрон; Нафталин-1,4,5,8-тетракарбоновая кислота, диангидрид | 81-30-1 | 1 | а | 2 | - |
27 | N,N'-Бис(2-аминоэтил)-1,2-этандиамин+; Триэтилентетрамин | 112-24-3 | 0,3 | п + а | 2 | - |
28 | Бис(диметилдитиокарбамат) цинка; Диметилдитиокарбамат цинка; Мильбекс | 137-30-4 | 0,3 | а | 2 | - |
29 | Диэтилдитиокарбамат цинка; Этилцимат | 14324-74-2 | 0,3 | а | 2 | - |
30 | 1,1-Бис(полиэтокси)-2-гептадеценил-2- имидазолина ацетат+; Оксамид | - | 0,5 | п + а | 2 | - |
31 | 1,5-Бис(фур-2-ил)пента-1,4-диен-3-он | 886-77-1 | 10 | п + а | 3 | - |
32 | 1,3-Бис-(4-хлорбензилиденамино)гуанидин гидрохлорид+ | - | 0,5 | а | 2 | - |
33 | 1,3-Бис-(4-хлорбензилиденамино)гуанидин+; Химкокцид | 25875-51-8 | 0,5 | а | 2 | - |
34 | Боверин | 63428-82-0 | 0,3 | а | 2 | - |
35 | 0-(4-Бром-2,5-дихлорфенил)-0,0-диметил-тиофосфат | 2104-96-3 | 0,5 | п + а | 2 | - |
36 | Биомицин+; Флоримицин | 32988-50-4 | од | а | 2 | - |
37 | | 8021-83-8 | 0,1 | а | 2 | - |
38 | B-Галактозидаза | - | 4 | а | 3 | - |
39 | Гаприн (по белку) | - | 0,1 | а | 2 | - |
40 | N,N'-гексаметиленбисфурфуролиденамин; Бисфургин; Фурфуролиденамин | 17329-19-0 | 0,2 | п + а | 2 | - |
41 | | - | 3 | а | 3 | - |
42 | 2-(Z-Гептадец-8-енил)-1,1-бис(2-гидроксиэтил) имидазолинийхлорид | - | 0,5 | п + а | 2 | - |
43 | | 87250-17-7 | 0,5 | а | 2 | - |
44 | 2-[2-цис-(Гептадец-8-енил)-2-имидазолин-1-ил] этанол | 95-38-5 | 0,1 | п + а | 2 | - |
45 | 1,2-Диаминобензол; о-Фенилендиамин | 95-54-5 | 0,5 | п + а | 2 | - |
46 | 1,3-Диаминобензол; м-Фенилендиамин | 108-45-2 | 0,1 | п + а | 2 | - |
47 | 2,4-Диаминобензолсульфонат натрия 1,3-Фенилендиаминсульфокислоты натриевая соль | 3177-22-8 | 2 | а | 3 | - |
48 | | - | 0,5 | а | 2 | - |
49 | N,N-Дибензилэтилендиаминовая соль хлортетрациклина+; Дибиомицин | 1111-27-8 | 0,1 | а | 2 | - |
50 | | 79-57-2 | 0,1 | а | 2 | - |
51 | | 60-54-8 | 0,1 | а | 2 | - |
52 | Тетрациклина гидрохлорид | 64-75-5 | 0,1 | а | 2 | - |
53 | Тетрациклина 4-метилбензосульфонат | - | 3 | а | 3 | - |
54 | 0,0-Диметил(1-гидрокси-2,2,2-трихлорэтил)-фосфонат+; Хлорофос | 52-68-6 | 0,5 | п + а | 2 | - |
55 | Диметилдитиокарбамат натрия; Карбамат МН | 128-04-1 | 0,5 | а | 2 | - |
56 | 0,0-Диметил-0-(2,5-дихлор-4-иодфенил)-тиофосфат; Иодофенфос | 18181-70-9 | 0,5 | п + а | 2 | - |
57 | [28-[5R,6R]3,3-Диметил-7-оксо-6-[[(2R)-[[(2-оксоимидазоллидин-1-ил)карбонил]амино]фенилацетил]амино]-4-тиа-1-азабицикло [3,2,0]гептан-2-карбоновая кислота; Азлоциллин | 37091-66-0 | 0,1 | а | 2 | - |
58 | | 61-33-6 | 0,1 | а | 2 | - |
59 | 0,0-Диметил-0-(2,4,5-трихлорфенил)-тиофосфат | 299-84-3 | 0,3 | и + а | 2 | - |
60 | N,N-Диметил-2-хлор-10H-фенотиазин-10-пропанамин гидрохлорид+; 10-(3-Диметиламинопропил)-2-хлор-10H фенотиазин гидрохлорид; Аминазин | 69-09-0 | 0,3 | а | 2 | - |
61 | | 27025-49-6 | 0,1 | а | 2 | - |
62 | Диприн (по белку) | - | 0,3 | а | 2 | - |
63 | Дифенилгуанидин+; Амидодианилинметан | 102-06-7 | 0,3/0,1 | а | 2 | - |
64 | N,N'-Дифурфурилиденфенилен-1,4-диамин+ | 19247-68-8 | 2 | п + а | 2 | - |
65 | 3,5-Дихлорбензолсульфонамид | 19797-32-1 | 0,1 | а | 2 | - |
66 | 4-Дихлорметилен-1,2,3,3,5,5-гексанхлорциклопент-1-ен+ | 3424-05-3 | 0,1 | п + а | 2 | - |
67 | 3,4-Дихлорфенилизоцианат | 102-36-3 | 0,3 | п | 3 | - |
68 | Дихлорэтановая кислота; Дихлоруксусная кислота | 79-43-6 | 4 | п + а | 3 | - |
70 | | 59-46-1 | 0,5 | а | 2 | - |
71 | | 51-05-8 | 0,5 | а | 2 | - |
72 | Доксициклин гидрохлорид+ | 100929-47-3 | 0,4 | а | 2 | - |
73 | Доксициклин тозилат+ | - | 0,4 | а | 2 | - |
74 | Дрожжи кормовые сухие, выращенные на послеспиртовой барде | - | 0,3 | а | 2 | - |
75 | 1,1'-Иминобис(пропан-2-ол)+ | 110-97-4 | 1 | п + а | 2 | - |
76 | Какао порошок | | 2 | а | 3 | - |
77 | Канифоль | 8050-99-7 | 4 | п + а | 3 | - |
78 | | 4800-94-6 | 0,1 | а | 2 | - |
79 | 4-Карбометоксисульфинилхлорид | - | 1 | а | 2 | - |
80 | Лигносульфонат модифицированный гранулированный на сульфате натрия | - | 2 | а | 3 | - |
81 | Липрин/по белку/ | - | 0,1 | а | 2 | - |
82 | Марганец карбонат гидрат+ | 34156-69-9 | 1,5/0,5 | а | 2 | - |
83 | Марганец нитрат гексагидрат+ Марганец азотно-кислый гексагидрат | 17141-63-8 | 1,5/0,5 | а | 2 | - |
84 | Марганец сульфат пентагидрат+ Марганец серно-кислый пентагидрат | 10034-96-5 | 1,5/0,5 | а | 2 | - |
85 | Метациклин гидрохлорид+ | 3963-95-9 | 0,4 | а | 2 | - |
86 | 1,1'-Метиленбис(4-изоцианатбензол)+ | 101-68-8 | 0,5 | п + а | 2 | - |
87 | Метилкарбамат 1-нафталенол; Севин; Метилкарбаминовой кислоты нафт-1-иловый эфир | 63-25-2 | 1 | а | 2 | - |
88 | 2-Метилпроп-2-еноилхлорид; Метакриловой кислоты хлорангидрид | 920-46-7 | 0,3 | п | 2 | - |
89 | 2-Метилпроп-2-енонитрил+; Метакриловой кислоты нитрил | 126-98-7 | 1 | п | 2 | - |
90 | 5-Метилтетрагидро-1,3-изобензофурандион | 34090-76-1 | 1 | а | 2 | - |
91 | Метирам | 9006-42-2 | 0,5 | а | 2 | - |
92 | Молибден, растворимые соединения в виде пыли | - | 4 | а | 3 | - |
93 | Моющее синтетическое средство "Лоск" | - | 3 | а | 3 | - |
94 | Моющее синтетическое средство "Ариель" | - | 5 | а | 3 | - |
95 | Моющее синтетическое средство "Миф Универсал" | - | 5 | а | 3 | - |
96 | Моющее синтетическое средство "Тайд" | - | 5 | а | 3 | - |
97 | Моющие синтетические средства "Био-С", "Бриз", "Вихрь", "Лотос", "Лотос-автомат", "Ока", "Эра", "Эра-А", "Юка" | - | 5 | а | 3 | - |
98 | Нафталин-2,6-дикарбоновой кислоты дихлорангидрид | 2351-36-2 | 0,5 | а | 2 | - |
99 | Неомицин | 1404-04-2 | 0,1 | а | 2 | - |
100 | 1,1',1"-Нитрилотрис(пропан-2-ол)+ | 122-20-3 | 5 | п + а | 3 | - |
101 | 1-[N-(5-Нитрофур-2-ил)метиленамино]имидазолидин-2,4-дион | 67-20-9 | 0,5 | а | 2 | - |
102 | Олеандомицинфосфат+ (1:1) | 7060-74-4 | 0,4 | а | 2 | - |
103 | Панкреатин | - | 1 | а | 2 | - |
104 | Пентандиаль; Глутаровый альдегид | 111-30-8 | 5 | п | 3 | - |
105 | Периклазохромитовых и хромитопериклазовых огнеупорных изделий пыль | - | -/4 | а | 4 | Ф |
106 | Поли-2-гидроксибутановая кислота; | - | 0,1 | а | 2 | - |
107 | | 9012-76-4 | 2 | а | 3 | - |
108 | | - | 2 | а | 3 | - |
109 | Полимиксин E 2,7-L-треонин | 71029-35-1 | 0,1 | а | 2 | - |
110 | Полифталоцианин кобальта, натриевая соль | - | 5 | а | 3 | - |
111 | Полихлорпинен+ | - | 0,2 | п | 2 | - |
112 | Проп-2-еноилхлорид+; Акриловой кислоты ангидрид; Акрилоилхлорид | 814-68-6 | 0,3 | п | 2 | - |
113 | Проп-2-енонитрил+; Акриловой кислоты нитрил; Акрилонитрил | 107-13-1 | 1,5/0,5 | п | 2 | - |
114 | Протеаза щелочная (активность 6000 ед.) | 9073-77-2 | 0,5 | а | 2 | - |
115 | Пыль растительного и животного происхождения: | | | | | |
а) с примесью диоксида кремния от 2 до 1% | - | -/4 | а | 4 | Ф |
б) зерновая | - | -/4 | а | 3 | Ф |
в) лубяная, хлопчатобумажная, хлопковая, льняная, шерстяная, пуховая и др. (с примесью диоксида кремния более 10%) | - | -/2 | а | 4 | Ф |
г) мучная, древесная (с примесью диоксида кремния менее 2%) | - | - | а | 4 | Ф |
д) хлопковая мука (по белку) | - | - | а | 3 | - |
116 | Пыльца бабочек зерновой моли | - | 0,1 | а | 2 | - |
117 | Рибофлавин | 83-88-5 | 1 | а | 2 | - |
118 | Смола дициандиамидоформальдегидная+ | - | 0,2 | а | 2 | - |
119 | Табак | - | 3 | а | 3 | - |
120 | Тетрагидроизобензофуран-1,3-дион; Циклогекс-1-ен-1,2-дикарбоновой кислоты ангидрид | 26266-63-7 | 0,7 | а | 2 | - |
121 | Тетрагидрометилизобензофуран-1,3-дион | 11070-44-3 | 1 | а | 2 | - |
122 | Теграметилтиопероксидикарбондиамид+ Тетраметилтиурамдисульфид; Тиурам Д; ТМТД | 137-26-8 | 1,5/0,5 | а | 2 | - |
123 | 2,3,5,6-Тетрахлорбензол-1,4-дикарбоксилдихлорид; 2,3,5,6-Тетрахлортерефталевой кислоты дихлорангидрид | 719-32-4 | 1 | а | 2 | - |
124 | N-Фенил-2,4,6-тринитробензамид; 2,4,6-Тринитробензойной кислоты анилид | 7461-51-0 | 1 | а | 2 | - |
125 | Фенолформальдегидные смолы (летучие продукты): | | | | | |
а) контроль по фенолу | - | 0,1 | п | 2 | - |
б) контроль по формальдегиду | - | 0,05 | п | 2 | - |
126 | Фенопласты | 9003-35-4 | -/6 | а | 3 | Ф |
127 | Формальдегид+ | 50-00-0 | 0,5 | п | 2 | О |
128 | Фуран+ | 110-00-9 | 1,5/0,5 | п | 2 | - |
129 | Фуран-2-альдегид+; 2-Фуральдегид; 2-Фурфуральдегид; Фурфураль | 98-01-1 | 10 | п | 3 | - |
130 | 2,5-Фурандион+; Малеиновый ангидрид | 108-31-6 | 1 | п + а | 2 | - |
131 | N-Хлорбензолсульфонамид натрия гидрат; Монохлорамин; Хлорамин Б | 127-52-6 | 1 | п + а | 2 | - |
132 | | 57-62-5 | 0,1 | а | 2 | - |
133 | Хлорметациклин тозилат+ | - | 3 | а | 3 | - |
134 | (Хлорметил)оксиран+; Эпихлоргидрин; 1-Хлор-2,3-эпоксипропан | 106-89-8 | 2/1 | п | 2 | - |
135 | N-(Хлорметил)фталимид+ | 17564-64-6 | 0,1 | а | 2 | - |
136 | Хлорфенилизоцианат+ (3- и 4-изомеры) | 1885-81-0 | 0,5 | п | 2 | О |
137 | диХром триоксид (по хрому Cr (+3)) | 1308-38-9 | 3/1 | а | 3 | - |
138 | Хром трифторид (по фтору); Хром фтористый | 7788-97-8 | 2,5/0,5 | а | 3 | - |
139 | Хром фосфат | 7789-04-4 | 2 | а | 3 | - |
140 | 1-Циангуанидин; Дициандиамин | 461-58-5 | 0,5 | а | 2 | - |
141 | N-Циклогексилимид дихлормалеат+ | - | 0,5 | а | 2 | - |
142 | Эпоксидные смолы (летучие продукты) (контроль по эпихлоргидрину): | - | - | - | - | - |
а) ЭД-5 (ЭД-20), Э-40, эпокситрифенольная ЭП-20 | - | 1 | п | 2 | - |
б) УП-666-1, УП-666-2, УП-666-3, УП-671, УП-671-Д, УП-677, УП-680, УП-682 | - | 0,5 | п | 2 | - |
в) УП-650, УП-650-Т | - | 0,3 | п + а | 2 | - |
г) УП2124, Э-181, ДЭГ-1 | - | 0,2 | п | 2 | - |
д) ЭА | - | 0,1 | п | 2 | - |
143 | Эпоксидный клей УП-5-240 (летучие продукты)/контроль по эпихлоргидрину/ | - | 0,5 | п | 2 | - |
144 | Эприн (по белку) | - | 0,3 | а | 2 | - |
145 | Эритромицин+ | 114-07-8 | 0,4 | а | 2 | - |
146 | 1,2-Этенбис(дитиокарбамат)цинка; Купрозан; Цинеб | 12122-67-7 | 0,5 | а | 2 | - |
147 | Этил-4-аминобензоат+; Анестезин | 94-09-7 | 0,5 | а | 2 | - |
Примечание: + - требуется специальная защита кожи и глаз; <*> - преимущественное агрегатное состояние в воздухе в условиях производства: п - пары и (или) газы; а - аэрозоль. <**> - наряду с аллергическим эффектом представлены дополнительные особенности действия вещества: О - вещество с остронаправленным механизмом действия, К - канцероген, Ф - аэрозоль преимущественно фиброгенного действия. По степени доказанности опасности аллергена для человека и при испытании на животных аллергены разделяются на категории: - высокоопасный аллерген - имеются доказательства: респираторной гиперчувствительности человека к аллергену; сенсибилизации человека при контакте аллергена с кожными покровами; выраженного сенсибилизирующего действия при испытании на животных (сенсибилизированы все особи, Lim sens < Lira chr). Сенсибилизация является лимитирующим критерием гигиенического нормирования; - умеренно опасный аллерген - имеются доказательства: респираторной гиперчувствительности человека к аллергену; сенсибилизации человека при контакте аллергена с кожными покровами; умеренного сенсибилизирующего действия при испытании на животных (сенсибилизированы более 30 - 50% особей). Сенсибилизация не является лимитирующим критерием гигиенического нормирования: Lira sens равен или выше Lim chr |
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон
от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2. Федеральный закон от 26.07.2008 N 102 "Об обеспечении единства измерений".
3. СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней".
4. СП 2.1.3678-20 "Санитарно-эпидемиологические требования к эксплуатации помещений, зданий, сооружений, оборудования и транспорта, а также условиям деятельности хозяйствующих субъектов, осуществляющих продажу товаров, выполнение работ или оказание услуг".
5. Приказ Минтруда России N 988н, Минздрава России N 1420н от 31.12.2020 "Об утверждении перечня вредных и (или) опасных производственных факторов и работ, при выполнении которых проводятся обязательные предварительные медицинские осмотры при поступлении на работу и периодические медицинские осмотры".
6. Приказ Минздравсоцразвития России
от 23.07.2010 N 541н "Об утверждении единого квалификационного справочника должностей руководителей, специалистов и служащих, раздел "Квалификационные характеристики должностей работников в сфере здравоохранения".
7. Приказ Минздрава России
от 29.04.2025 N 258н "Об утверждении порядка проведения экспертизы связи заболевания с профессией, учетной формы извещения об установлении диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, уточнении или отмене диагноза - острое (хроническое) профессиональное заболевание, учетной формы медицинского заключения о наличии или об отсутствии профессионального заболевания, порядка учета профессионального заболевания органом государственного санитарно-эпидемиологического контроля (надзора), проводившим расследование обстоятельств и причин возникновения у работника профессионального заболевания, формы протокола заседания комиссии по расследованию случая профессионального заболевания".
8. Приказ Минздравмедпрома России от 16.08.1994 N 170 "О мерах по совершенствованию профилактики и лечения ВИЧ-инфекции в Российской Федерации".
9. Приказ Минздрава СССР от 12.07.1989 N 408 "О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране".
10. Р 2.2.2006-05 "Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда".
11. ГОСТ 1770-74 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".
12. ГОСТ Р 58144-2018 "Вода дистиллированная. Технические условия".
13. ГОСТ 12026-76 "Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия".
14. ГОСТ Р 53079.4-2008 "Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа".
15. ГОСТ 33044-2014 "Принципы надлежащей лабораторной практики".
Методические рекомендации разработаны ФБУН "Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека" (Э.Р. Шайхлисламова, Е.Р. Абдрахманова, Л.М. Масягутова, А.Р. Музафарова, А.И. Борисова, Л.А. Рафикова, Р.А. Даукаев); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Башкортостан" (И.И. Хисамиев); ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России (Э.А. Имельбаева).
